熒光定量PCR耗材的使用和選擇注意事項(xiàng)

　　PCR板

　　PCR板是一種在聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction ,PCR)中主要作為參與擴(kuò)增反應(yīng)的引物、Taq DNA聚合酶、dNTP、模板核酸、Mg、緩沖液等的承載物。

　　PCR板材質(zhì)

　　其本身材質(zhì)在當(dāng)今主要以聚丙烯(PP)為主，能更好適應(yīng)PCR反應(yīng)過程中反復(fù)高低溫設(shè)定，并且能夠?qū)崿F(xiàn)高溫高壓滅菌操作。為配合排槍、PCR儀等實(shí)現(xiàn)高通量操作，較常使用的為96孔或384孔的PCR板。板型符合SBS國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，且為適應(yīng)不同廠家的PCR儀，根據(jù)裙邊設(shè)計(jì)又可分為無裙邊、半裙邊、升裙邊和全裙邊四種設(shè)計(jì)模式。

　　PCR板常見顏色

　　有透明和白色，其中白色更適合用于新型的實(shí)時(shí)熒光定量PCR。

　　PCR板用途

　　廣泛應(yīng)用于遺傳、生化、免疫、醫(yī)藥等領(lǐng)域，不僅應(yīng)用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎(chǔ)研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA，RNA的地方，屬于實(shí)驗(yàn)室一次性易耗品。

　　如何正確使用96孔PCR孔板

　　PCR板有透明和乳白色可選，其中乳白色更適合用于頂部采集熒光信號(hào)的新型熒光定量PCR儀(如伯樂CFX系列，ABI 7500fast 以上型號(hào)， Roche 480系列)，但如果熒光定量PCR儀是底部光源的，則應(yīng)選擇透明的。

　　PCR板根據(jù)裙邊設(shè)計(jì)又可分為無裙邊、半裙邊和全裙邊三種設(shè)計(jì)模式，不同廠家的熒光定量PCR儀會(huì)設(shè)計(jì)不同的切角或邊緣凸起，請(qǐng)選擇適合該P(yáng)CR儀的板子。

　　PCR板又分100ul體積(矮板)和200ul體積(高板)，根據(jù)機(jī)型的不同選擇，選擇不同高度孔板，避免高度錯(cuò)誤對(duì)機(jī)器造成破壞和加熱不均導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真。

　　當(dāng)使用96孔板做熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)的時(shí)候，推薦使用光學(xué)膜代來密封反應(yīng)孔。正確的封膜方法是：先沿著96孔板的縱向壓膜，然后橫向，最后沿著板的邊緣按壓使之密封。具體手法見下面圖示：

　　加樣后會(huì)在管壁上飛濺一些小液滴，另外反應(yīng)體系內(nèi)也會(huì)有一些氣泡，需要離心去掉掛壁液滴和氣泡。請(qǐng)使用專用的微孔板離心機(jī)解決上述問題。

　　PCR板屬于一次性消耗品，生產(chǎn)一次成型，不建議剪開使用容易造成實(shí)驗(yàn)誤差增加，不能清洗或部分重復(fù)利用。不要為了節(jié)省一點(diǎn)小錢，而給實(shí)驗(yàn)帶來后續(xù)分析上的困擾。

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